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奧林巴斯偏光顯微鏡是一種用于觀察材料的光學(xué)顯微鏡,其特點(diǎn)在于可以通過旋轉(zhuǎn)偏振器和樣品之間的相對方向來觀察材料的各種光學(xué)性質(zhì),例如雙折射、吸收等。該類型顯微鏡廣泛應(yīng)用于地質(zhì)、材料科學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域。
在常規(guī)奧林巴斯偏光顯微鏡的電鏡方法中,樣品需要脫水,所脫掉的水份平均約占組織重量的三分之二;從取材到鏡下觀察,樣品還要經(jīng)過一系列的化學(xué)與物理因素的處理。
上述任何一個因素都可能使生物樣品的成份和超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,從而造成人工假象。為此,建立了冷凍技術(shù)。冷凍技術(shù)不僅能解決某些常規(guī)方法不可避免的問題,揭示常規(guī)方法無法看到的一些結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié),而且所得結(jié)果也可與常規(guī)方法的結(jié)果進(jìn)行比較,檢驗(yàn)后者的客觀真實(shí)性。
奧林巴斯偏光顯微鏡的各種冷凍技術(shù)面臨的一個共同問題是避免產(chǎn)生冰晶、特別是大的冰晶。這些冰晶一旦產(chǎn)生,將會使細(xì)胞結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞。
因此,要設(shè)法在冷凍過程中只產(chǎn)生很小的冰晶,如果可能,好不產(chǎn)生冰晶,即使組織中的水份處在“玻璃態(tài)”。為了達(dá)到這一目的,目前采取的措施有兩個:
(1)單純使用速凍時,為了不產(chǎn)生冰品,組織的冷凍速度應(yīng)達(dá)到一100℃/(s·c航)或更快;
?。?)使用保護(hù)劑后,組織的冷凍速度可降至10—lo09C/[s’cm),而不致產(chǎn)生大的冰晶。
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